各位老师好，今天我和赵锋老师和大家聊聊结核杆菌斑点试验（T-SPOT）。
现在免疫缺陷患者越来越多，结核病的发生率也逐年升高，传统实验室检查对标本要求很高，阳性率不高，TSPOT是近些年临床判断有无结核菌感染的新方法之一，但是也存在一些争议，所以今天我们聊聊TSPOT。
您的实验室开展结核杆菌斑点试验了吗？
如果开展了，您觉得这个试验与传统的方法或分子方法有什么不同？
T-SPOT结果阴性是否可以排除结核杆菌感染的可能？
你觉得这个试验什么地方需要改进？大家觉得怎么样？
初识T-SPOT（简介）很多老师还不太了解这个试验。我先简单介绍一下。该试验是检测结核分枝杆菌抗原特异性的效应T淋巴细胞。结核感染会引起强烈的细胞免疫反应，而T淋巴细胞在细胞免疫应答中起关键作用。结核感染后T淋巴细胞受到结核抗原的刺激被致敏，抗原特异性致敏T淋巴细胞再次受到结核抗原的刺激后会增殖、活化并且分泌释放细胞因子，通过检测细胞因子证明抗原特异性效应T淋巴细胞的存在，反映机体结核感染的情况。（混合淋巴细胞培养+干扰素测定）。
一．结核抗体或抗酸涂片等其它指标阳性，T-SPOT阴性时报告结果如何解读
结核抗体阳性，tspot阴性何解？你如何向医生和患者解释呢？那抗酸阳性，胸片也支持结核，而T一SPOT阴性怎么解释?
结核分枝杆菌感染人会使免疫系统或细胞产生记忆，也就是我们说的细胞介导的免疫应答，所以结核抗体试验如何反映这种免疫过程？如果说结核抗体试验反应的是体液免疫的话，大家觉得结核菌素皮肤试验TST和TSPOT有什么不同呢？TSPOT是免疫试验，有很多因素影响结果，比如取血量少，淋巴细胞分离量较少，对结果影响挺大。读结果比较主观，所以需要经验。
抗体阳tspot阴性很正常啊，检查的不一样，抗体是既往感染，tspot是有活菌，结核抗体是体液免疫的范畴tspot是细胞免疫的范畴，因为结核感染机体是细胞免疫为主，所以Tspot更准一些。结核抗体的特异性要差一些。Tspot主要检测的是干扰素，对一些肿瘤或免疫缺陷的疾病也可能假阳性，主要用于排阳。结果阳性只能说明患者曾经感染过结核菌，好像阴性结果排除结核意义更大一点。
Q满思金：TST只是表明机体对结核分支杆菌有变态反应，就是说对结核分支杆菌的识别能力，并不能确认是否有结核病，有较高的假阳性及假阴性率，T_SPOT在诊断潜伏性结核病有较高的敏感度及特异性，取血量和抽血时间也很重要，个人理解，不知对不?
A严岩：
满思金T-SPOT虽然无法区分潜伏性结核与现症结核，但是只要有结核感染的就可能阳性，而且不受卡介苗等因素影响，较TST好。TST影响因素太多。我们实验室的注意事项
（1）采血后立即颠倒采血管数次，以便使血液与抗凝剂充分混匀。
（2）样本室温（18～25℃）保存与运输，不得冷冻或冷藏。
（3）样本采集后4小时内运送到实验室，8小时内完成检测。
（4）1周内有输血史或做过PET-CT的患者会影响血液中淋巴细胞的分离，建议两周后再检测。
（5）运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果。
韩云港：潜伏性结核感染的斑点数有可能高于活动性结核,因此T-SPOT.TB难以区分活动性结核和潜伏性结核感染。其原因可能有两点:(1)潜伏性结核感染者的免疫功能良好,少量的抗原刺激就激发出活跃的保护性免疫;(2)活动性结核患者免疫功能低下,大量的抗原刺激也不足以激起有效的细胞免疫。T-SPOT.TB的斑点数虽然并不精确地与结核活动程度呈正相关,但仍然存在着结核活动程度越高斑点数越多的趋势。
严岩：TSPOT的焦点是致敏T细胞，斑点数无法简单区分潜伏和发病。
韩云港：?TST敏感性低，免疫力低下人群其敏感性大大降低，特异性也不高，与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉易造成“假阳性”结果。而TSPOT受免疫因素影响小，相对TST敏感性更高，还有ESAT6和CFP10两个抗原在卡介苗和环境中绝大多数NTM中均不存在，也使得比TST特异性更高～
赵锋：韩老师，NTM也可以有阳性的。
Q严岩：各位老师，读斑点使用什么方法？
A韩云港：
医院我们用的放大镜，电脑屏幕上显示孔的斑点数，不知道严老师用的什么方法？严岩：第一个效果最好，在电脑上成像，非常清楚。第二个是斑点自动读数仪，可以换滤光片，也可以读荧光。
Q严岩：哪些NTM会有ESAT6和CFP10两个抗原？
A严岩：M.tuberculosis–specificantigensincludeearlysecretedantigenictarget6(ESAT-6)andculturefiltrateprotein10(CFP-10).Theseareencodedbygeneslocatedwithintheregionofdifference1(RD1)segmentoftheM.tuberculosisgenome.TheyaremorespecificforM.tuberculosisthanpurifiedproteinderivative(PPD)becausetheyarenotsharedwithanyBCGvaccinestrainsormostspeciesofNTMotherthanM.marinum,M.kansasii,M.szulgai,andM.flavescens。
二.T-SPOT与传统方法或分子方法有何不同？
复兴技术人员：与传统PPD实验相比T-SPOT优势是能避免卡介苗和绝大多数环境分枝杆菌产生交叉反应。与传统的抗酸杆菌染色相比T-SPOT优势在于血液标本获取更加容易;灵敏度更高；最大程度避免环境分支杆菌的影响。与分子生物学诊断比较T-SPOT优势是避免了交叉污染，检出率更高，对实验室开展要求门槛更低。
三.T-SPOT结果阴性是否可以排除结核杆菌感染的可能？
复兴技术人员：T-SPOT的阴性结果对结核感染的排除率达到95%以上。造成假阴性可能有患者处于窗口期；严重免疫功能不全（HIV感染者）；特殊肺外结核；实验非正常操作等。
三.IGRA目前有两种检测方法：斑点T-SPOT和血中GAMMA干扰素QFT-GIT。大家觉得哪种方法好一些？TSPOT标本除了血，可以送体液吗？
韩云港：摘自上面分享的文章：“基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点,T-SPOT.TB技术的检测物已不仅局限于静脉血,支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断”，请问严老师对于除了血液其他的体液怎么做TSPOT试验？
严岩：我们做的比较多的是胸腹水，其他体液也做过，主要是收集淋巴细胞比较困难，标本量不够。做法与血液相似，但是淋巴细胞数量过低会出现假阴性。
韩云港：请问你们那做的胸腹水前处理时候，留取多少毫升？阳性率如何？
严岩：我们一般通知临床使用50ml无菌容器留取，使用两只15ml离心管分离淋巴细胞。阳性率，我不了解，但是听说有时胸腹水标本TSPOT阳性，而血标本结果阴性。
作者简介严岩，主治医师，年毕业于北京医科大学医疗系医学检验专业，年获得北京大学医学部病原生物学硕士学位。年至医院检验科工作，年参加并通过了卫生部组织的第一批执业医师考试，获得医师资格。年以来一直从事临床微生物学的医疗、教学和科研工作。个人专长：病原微生物学诊断，尤其是细菌性感染的病原学诊断。长期参与北京大学医学部八年制和检验系的教学工作，多次荣获北京大学医学医院优秀教师。微生物学书籍主编一部参编两部。硕士期间从事生物被膜体外培养模型的建立和影响因素的研究，发表论文一篇。年发表病例报告《罕见不可分群脑膜炎奈瑟菌致幼女阴道炎一例》。
说明：本案例来源于“临床微生物论坛讨论群”，医院严岩老师分享。未经允许，不得私自转载，转载须注明出处与作者。欢迎各位老师将您的经验、精彩案例分享给大家。在北京治疗白癜风哪个医院最好白癫风早期
